不溶性微粒的檢測對(duì)注射用藥來講是必須要檢測的一個(gè)指標(biāo)，在很早之前這個(gè)指標(biāo)的檢測是沒有要求的！今天我們來梳理下UPS788和CP0903對(duì)不溶性微粒指標(biāo)檢測的發(fā)展過程和未來的趨勢，希望可以給廣大的制藥同行帶來些許有用的信息和幫助。也歡迎大家溝通。上海梓夢(mèng)科技有限公司為您提供全面的粒度和zeta電位分析解決方案。

1.USP788的發(fā)展歷程

1905 –USP將腸胃外溶液作為藥典藥物。沒有提及顆粒物含量或凈度。

1916年NF IV包含6篇注射液專著；然而，沒有提到外觀。

1936 NF VI 包括凈度的定義，定義為“透明度"：

1942年，USP XII和NF VII都試圖進(jìn)一步界定“基本上沒有"一詞的意圖。

1946 USP包括術(shù)語“基本上沒有"一詞。

1949年USP修訂委員會(huì)去掉了透明度測試，并將其替代為要求“…在注射的準(zhǔn)備中應(yīng)該謹(jǐn)慎行事以防止污染"，“…每次注射在最終容器中都要進(jìn)行目視檢查" 。

1965年 澳大利亞堪培拉國家生物標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室出版了微粒標(biāo)準(zhǔn)，澳大利亞次提出限制標(biāo)準(zhǔn)，刺激了美國的制約和監(jiān)管活動(dòng)。

1966年FDA大容量腸胃外用藥安全研討會(huì)；

1972年澳大利亞對(duì)腸胃外用藥的Coulter和光阻法計(jì)數(shù)進(jìn)行比較；

              NMT=No more than

              NMT 100 顆粒/mL ≥2µm

              NMT 5 顆粒/mL ≥20µm

1974年 外國顆粒標(biāo)準(zhǔn)的修訂

      大不列顛

             NMT 1000 顆粒/mL ≥ 2µm

              NMT 100 顆粒/mL ≥ 5µm

      澳大利亞

              NMT 1000 顆粒/mL ≥ 2µm

               NMT 250 顆粒/mL ≥ 3.5µm

               NMT 100 顆粒/mL ≥ 5µm

               NMT 25 顆粒/mL ≥ 10µm

               NMT 2 顆粒/mL ≥ 20µm

1974年 USP于1974年12月提出：

              NMT 50 顆粒/mL ≥ 10µm

               NMT 5 顆粒/mL ≥ 25µm

1974年年底USP發(fā)布了LVP標(biāo)準(zhǔn)；

1975年 USPXIX <788>章節(jié)使用膜顯微鏡法測試評(píng)估大容量注射的顆粒（大容量是指超過100mL/瓶）。 

1980年 英國藥典發(fā)布了新的標(biāo)準(zhǔn)，使用電阻法（Coulter）或消光法（HIAC）儀器。

1984年USP修訂<788>以區(qū)分LVP使用膜顯微鏡和SVP使用HIAC提出的限度：

1985年USP XXI<788>章節(jié)中，小容量腸胃外用藥（SVP，100mL和更低體積）中增加一種新的消光（光阻）方法。

1986年1月1日，SVP標(biāo)準(zhǔn)和測試方法成為正式文件。

1990 USP XXII 通過膜定義了新的限制條件

1995 USP 23 <788> 將光阻法改為或方法。顯微計(jì)數(shù)法作為第二法。

判定標(biāo)準(zhǔn)做了修改并沿用至今：

2004年 美國藥典USP27對(duì)滴眼液新章節(jié)<789>做了規(guī)定:

歐洲藥典（Ph.Eur.）和日本藥典（JP）這兩個(gè)重要的非美國藥典組織針對(duì)粒子限度將收錄USP變更為收錄SVI。

Ph. Eur. 在2005年變更為收錄 SVI 產(chǎn)品。

JP 是在2006年升級(jí)收錄SVI產(chǎn)品。

2007年 三個(gè)組織統(tǒng)一了<788>方法，USP <788>，EP和JP 等。

2010年 USP粒度研討會(huì)提及Flow Imaging Method用來測試蛋白產(chǎn)品

2017年 USP40收錄不溶性微粒檢測第三法-微流圖像法Flow Imaging method。

2.《中國藥典》CP0903對(duì)不溶性微粒檢測規(guī)定發(fā)展歷程梳理

1985年 《中國藥典》收載注射液中不溶性微粒檢測方法，至1995年采用顯微計(jì)數(shù)法檢查

2000年 《中國藥典》增加光阻法為不溶性微粒檢測第二法，＞100ml LVP

2005年 《中國藥典》將光阻法由第二法改為法，作為方法。SVP+滅菌粉末

2010年 《中國藥典》CP0903更新，和國際接軌保持一致。

-至今沒有做大的更新。

3.不溶性微粒檢測法-光阻法不溶性微粒儀概況介紹

目前光阻法不溶性微粒儀國內(nèi)外廠家比較多，技術(shù)比較成熟，操作軟件基本都符合制藥行業(yè)中21CFR Part11的要求。主要的廠家品牌有美國貝克曼庫爾特、德國Cloze、美國PSS、美國PMS，進(jìn)口各品牌性能上各有優(yōu)勢。國產(chǎn)品牌主要有天津天河和天大天發(fā)，近幾年有幾個(gè)國產(chǎn)品牌也相繼誕生，產(chǎn)品還有待市場檢驗(yàn)。

光阻法不溶性微粒儀原理如下圖：

結(jié)構(gòu)比較簡單，如圖一，激光光源發(fā)射激光經(jīng)過樣品池，樣品池中的顆粒流經(jīng)樣品池，顆粒會(huì)對(duì)激光有遮擋作用，使得右側(cè)檢測器接收到的激光信號(hào)減少，光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電壓脈沖值，顆粒越大遮擋的面就越大，檢測到的信號(hào)差就越大。從而得到粒度大小和數(shù)量。

光阻法不溶性微粒儀適用的劑型主要有，澄清的大輸液、小針劑、凍干粉、滴眼劑等。對(duì)于一些帶有顏色的、粘稠度大的、不透明的樣品如注射乳劑、脂質(zhì)體、白蛋白、混懸劑、mRNA等就沒法用光阻法進(jìn)行測試了，需要采用顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀測試。

4.不溶性微粒檢測第二法-顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀介紹

隨著醫(yī)藥行業(yè)技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步，很多特殊復(fù)雜制劑的增多，如mRNA、乳劑、脂質(zhì)體、混懸劑等，越來越多的品種已經(jīng)無法采用光阻法檢測不溶性微粒，需要選擇顯微計(jì)數(shù)法（顯微鏡法）來做測試，USP788稱為Microscopic (Membrance Microscope Method)。

從《中國藥典》CP0903建立，大部分的用戶都是采用常規(guī)的反射光源顯微鏡來做測試，人工進(jìn)行測量和計(jì)數(shù)。此種方法的優(yōu)點(diǎn)是成本低，對(duì)于顆粒可以很好的人眼進(jìn)行識(shí)別。缺點(diǎn)也很明顯，無法避免人為因素帶來的誤差，從法規(guī)上來看無法實(shí)現(xiàn)審計(jì)追蹤。

鑒于此上海梓夢(mèng)科技有限公司利用顯微鏡搭載自動(dòng)移動(dòng)平臺(tái)，通過操作軟件來控制平臺(tái)的移動(dòng)，對(duì)測試濾膜做逐行掃描，對(duì)整個(gè)濾膜做掃描、拼圖、合成為一張完整的濾膜圖片做分析，并按照藥典規(guī)定出具數(shù)據(jù)報(bào)告。

5.梓夢(mèng)科技MIP-01Z和ZMP930全自動(dòng)顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀介紹：

5.1設(shè)備構(gòu)成

型號(hào)ZMP930和MIP-01Z全自動(dòng)顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀主要是由顯微鏡主機(jī)、自動(dòng)移動(dòng)平臺(tái)、操作分析軟件構(gòu)成，有關(guān)的具體的操作也歡迎大家

5.2顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀需要注意的幾個(gè)細(xì)節(jié)：

5.2.1顯微鏡的選擇需要選擇反射光源（落射光源）

5.2.2放大倍數(shù)要確保是100倍

5.2.3光源角度可調(diào)

5.2.4軟件符合21CFR Part11要求

5.2.5濾膜的選擇

5.2.6測試環(huán)境的選擇

6.上海梓夢(mèng)科技ZMP-910全自動(dòng)顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀

型號(hào)ZMP910全自動(dòng)顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀在MIP-01Z的基礎(chǔ)上，結(jié)合用戶的反饋，做了全新升級(jí)，符合《中國藥典》CP0903的檢測要求。

設(shè)備特點(diǎn)：

1）符合ISO 13322-1靜態(tài)圖像法粒度儀標(biāo)準(zhǔn)要求

2）擺脫原有顯微鏡結(jié)構(gòu)，將光學(xué)放大部分設(shè)計(jì)成一體

3）軟件符合21CFR Part11要求

4）標(biāo)準(zhǔn)的放大倍數(shù)100倍

5）自帶防塵罩

6）可以給出粒度分布、粒形分布結(jié)果

7）按照《中國藥典》CP0903、USP788等標(biāo)準(zhǔn)出具報(bào)告

8）自定義報(bào)告

7.不溶性微粒檢測第三法-微流圖像法（Flow Imaging）不溶性微粒儀

隨著生物醫(yī)藥的發(fā)展，對(duì)不溶性微粒的檢測要求又提出了新的挑戰(zhàn)，就是硅油、蛋白自身的聚集的問題，這兩種方法會(huì)把蛋白本身判定為不溶性顆粒。如此常規(guī)的光阻法和顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀的測試都存在一定的限度。需要新的微流動(dòng)態(tài)圖像法（Flow Imaging）儀器做測試。此種方法目前在USP1788中有收錄，而在《中國藥典》中尚未收錄，此種方法已然是一種趨勢，感興趣的客戶可以做些了解。

梓夢(mèng)科技M3000 微流圖像法不溶性微粒儀采用動(dòng)態(tài)圖像法原理（Flow Imaging），符合ISO 13322-2標(biāo)準(zhǔn)要求。

產(chǎn)品主要特點(diǎn)有：

1）采用微流圖像法（Flow Imaging），無需像顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀一樣做繁瑣的樣品過濾等前處理；

2）測試范圍寬，可以達(dá)到0.5μm-1200μm；

3）采用自動(dòng)變倍遠(yuǎn)心鏡頭，無需更換不同倍率鏡頭；

4）采用1200萬像素的高清智能成像系統(tǒng)，分辨率達(dá)4096*3000

5）自動(dòng)區(qū)分蛋白聚集體、硅油、顆粒等

6）給出近30中不同粒度、粒形參數(shù)

      今天對(duì)于不溶性微粒的檢測方法和歷史演變過程做了簡單的梳理，現(xiàn)有方法的簡單介紹。希望可以給大家?guī)硪恍椭缧枰敿?xì)信息或者測試中遇到的各種問題，歡迎大家上海梓夢(mèng)科技，文中如有雷同或者不對(duì)之處，也請(qǐng)大家提出寶貴意見。